【关键词】 莪术 吉马酮 高效液相色谱法

　　中药莪术是姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Valeton，广西莪术Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang和温郁金Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling的根状茎，具抗肿瘤、抗菌、行气破血、消积止痛等功效，主治积滞胀痛、血腹痛、肝脾肿大、血滞经闭、早期宫颈癌［1］。首载于《雷公炮炙论》。主要产于四川、福建、浙江、广西等地。其中广西莪术Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang又名桂莪术，主要分布于广西桂中南地区。莪术中含挥发油、姜黄素等成分，挥发油为其抗肿瘤有效成分，姜黄素为其降血脂、抗氧化、抗炎的主要有效成分。研究中发现，莪术油中的吉马酮含量较高，且对癌细胞具有一定的抑制作用［2］。为了能更好地控制广西莪术的质量，现用HPLC法对广西境内不同产地的广西莪术进行含量测定，研究比较其含量差异。

　　1  仪器与试药

　　美国Agilent1100Series型高效液相色谱仪:四元泵，在线脱气机，自动进样器(G1313A)，柱温箱，可变波长检测器。Simplicity185型超纯水系统(MILLIPORE)。KQ-200VDB型双频数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。LG-16W型离心机（北京医用离心机厂）。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。吉马酮对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111665-200401)。药材采自各个产地，经本校药用植物教研室王建老师鉴定为姜科植物广西莪术Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件日本岛津公司Shim-pack CLC-ODS柱(6.0 mmID×15 cm，5 μm)；流动相为乙腈-水(60∶40)，流速：1 ml/min，柱温：35℃，检测波长215 nm。进样量5 μl。理论塔板数以吉马酮峰计应不低于6 000。在此色谱条件下，吉马酮对照品和桂莪术样品的HPLC色谱图分别见图1～2。

　　2.2  对照品溶液的配制精密称取吉马酮对照品11.65 mg，置10 ml量瓶中，加60%乙腈溶解并定容至刻度，即得吉马酮对照品储备液。 分别精密量取5 ，25，50，250，500 μl对照品储备液，置1 ml量瓶中，用60%乙腈定容至刻度，即得不同浓度的吉马酮对照品溶液。

　　2.3  供试样品溶液的制备取切碎的广西莪术鲜根茎5 g，精密称定，精密加入甲醇25 ml，称定重量，回流提取1 h，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，即得。

　　2.4  线性关系的考察将“2.2”项下5个浓度的对照品溶液注入高效液相色谱仪，进样量5 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积A对样品浓度C(μg/ml)进行回归，得标准曲线：A =15.93C-20.92，r=0.999 92，其线性范围为5.825～582.5 μg/ml。

　　图1  吉马酮对照品HPLC色谱图（略）

　　图2  桂莪术样品（桂平金田）HPLC色谱图（略）

　　2.5  精密度实验取对照品溶液，连续进样6次，进样5 μl/次，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为0.12%，说明仪器精密度很好。

　　2.6  稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，24 h不同时间间隔点进样分析，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为1.17%，结果表明样品溶液在24 h稳定。

　　2.7  重复性实验取同一莪术样品6份，切碎，混匀，精密称定，分别按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定其色谱图，并计算其吉马酮的含量,结果吉马酮的平均含量为4.23%,RSD为1.7%(n=6),表明该法重复性较好。

　　2.8  加样回收率实验精密称取吉马酮对照品10.9 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密称取已知吉马酮含量的切碎的广西莪术鲜根茎6份各2.5 g，各分别精密加入甲醇20 ml及上述对照品溶液5 ml，其余操作同“2.3”项中的方法，结果表明吉马酮平均回收率为101.41%，RSD=2.82%(n=6)，说明本方法准确度较好。数据见表1。

　　表1  加样回收率实验（略）

　　2.9  样品测定取不同产地的莪术鲜根茎样品，按“2.3”项下方法制备各供试品溶液。取供试液5 μl，注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，按标准曲线法计算各样品中吉马酮的含量，每个产地取3份样品求平均值。结果见表2。

　　表2  不同产地吉马酮含量测定结果比较（略）

　　3  讨论

　　广西自古以来就是桂莪术的道地产地，自20世纪60年代野生变家种以来，栽培历史较久，栽培经验丰富。在国家大力推广“三农”政策的今天，发展当地优势产业，开辟大量的桂莪术种植基地，成了农民发家致富的一条捷径。钦州市桂莪术种植面积约2 300 ha，占全广西莪术种植面积的50%以上，其中主要分布在钦北区、灵山陆屋和青塘镇。灵山陆屋镇已自发形成莪术集散地，每年收获季节有大量全国各地客商前来联系业务。有3 325户种植农户，种植面积达483.5 ha。在玉林、兴业、南宁、贵港也有广泛种植。

　　本实验考察了不同提取溶剂及不同提取方法、提取时间、溶剂量等影响因素对提取率的影响，确定了本实验所采用的5倍量甲醇为溶剂，回流提取30 min的最佳提取方法。

　　从实验数据上看,不同产地的桂莪术中吉马酮的含量有明显差异。其中福绵、港江、兴业三个产地吉马酮含量最高，金田、陆屋和成均吉马酮含量较高，三隆含量最低。由此得知，玉林市内种植的桂莪术吉马酮含量普遍高，建议应当大力推广种植，增加种植面积。钦州市种植面积最大，但吉马酮含量较玉林市低。

　　本实验建立了RP-HPLC法直接测定桂莪术中吉马酮含量的方法，通过方法学考察表明,该定量检测方法结果可靠，为桂莪术中吉马酮的分析研究提供了可信的检测手段。

　　【参考文献】
　　［1］ 国家药典委员会. 中国药典,Ⅰ部［S］.北京：人民卫生出版社，2005：194.

　　［2］ 王 炎，王慕邹. 莪术的质量研究［J］．药学学报，2001，36(11)：849